Método Precipitación con fosfato de calcio

Aplicación Animales

Precipitación con DEAE-Dextran

Animales

Microinyección directa

Eucariontes

Lipofección

Plantas, Animales

Electroporación

Eucariontes. Animales y Plantas

Transferencia por

Eucariontes.

Fundamento Se basa en la obtención de un precipitado entre el cloruro de calcio y el ADN en una solución salina de fosfatos, formando unos agregados que son endocitados/fagocitados por las células. El agregado de calcio protege al ADN de la degradación por las nucleasas celulares. (diethyl amino ethyl) dextrano es un polímero catiónico que facilita la penetración del ADN a la célula. Además protege de las nucleasas Inyección directa del vector de expresión en óvulos fecundados o células huésped utilizando una aguja fina de vidrio. Introducción mecánica mediante una micropipeta que se controla con un micromanipulador bajo un microoscopio de alta resolución. Se basa en la formación de complejos entre lípidos catiónicos y ADN, llamados liposomas. Dicho complejo tiene afinidad por la membrana y permite la entrada del ADN en el citosol. Introducción del vector de expresión mediante la aplicación de impulsos eléctricos (milisegundos) para inducir poros transitorios en la membrana de las células huesped

Fijación del vector de expresión sobre

Factores El tamaño y la calidad del precipitado es crítico para el éxito del proceso, que se afectado por factores como cambios en el pH. (Necesita un medio alcalino).

Desventajas Poco eficiente en los modelos in vivo.

Sencillo, reproducible y bajo costo, requiere pocas cantidades de ADN N/A

DEAEdextrano puede ser tóxico para la célula.

N/A

Intensidad del campo eléctrico, duración del impulso aplicado, concentración de DNA y de cationes divalentes. Inclusión de PEG. No requiere transporte de ADN, y es rápida (selección de transformantes después de 10 min). Factores críticos: cantidad y

Técnica muy sensible, requiere gran especialización del personal y equipo delicado, sofisticado y costoso. Trasformación uno en uno.

Elevado precio de los lípidos, además de que no todos los lípidos funcionan en todos los tipos celulares. Afecta la viabilidad de la célula

La transformación resulta más eficaz

microproyectiles o técnica biolística

Animales y plantas

Sistema de plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens

Plantas Levaduras, hongos filamentosos, así como células humanas Eucariontes Animales transgénicos

Transformación celular, seguida de clonación

Transformación de gametos

Animales

Fusión de protoplastos.

Animales, valiosos en algas y plantas

partículas; Implica la aceleración de microproyectiles (partículas de tungsteno o de oro de 1 a 2 µm de diámetro) a velocidades que les permita penetrar las paredes de las células. Este efecto se logra electrostáticamente o empleando cartuchos vacíos en un mecanismo de disparo modificado. Métodos actuales han llegado a utilizar aire comprimido. El disparo se hace generalmente, en condiciones de vació y el daño de la onda de choque a la célula se reduce al mínimo si se incorpora una cámara de expansión Bacteria que origina la enfermedad de los tumores de cuello en algunas plantas. La bacteria infecta una herida de la planta e incorpora un segmento del ADN del plásmido Ti en el genoma del hospedero. Conservación de las regiones externas de T-ADN. Añaden genes a células cultivadas o inactivarlos en ellas, los núcleos de las células transformadas con éxito se pueden transferir a óvulos enucleados e implantarlos en hembras receptoras para generar animales clonados de células somáticas, que también son transgénicos. Se pueden introducir genes en oocitos o espermatocitos y utilizar los gametos transformados para la fecundación, generando un animal completo. El método consiste en la fusión de células animales con bacterias que contienen el gen a ser introducido. Protoplastos y células animales son puestos en contacto; En el hibrido celular nuevo, el ADN proveniente de

velocidad de microproyectiles, el tipo de soporte para las células, y la concentración de espermidina y CaCl2, para unir el ADN a las partículas.

cuando se usa ADN linear, menores a 10 Kb (posible fragmentación >10 kb). Toxicidad de las partículas de tungsteno. Baja relación entre el total de células sometidas al bombardeo y el número de transferencia. No se puede controlar el número de copias integradas

Transferencia al genoma nuclear de la planta

Plantas resistentes a la infección

N/A

N/A

N/A

N/A

Una modificación rápida del medio ambiente iónico (CA2+ 50 mM + manitol 0.4mM a pH=10.5), agregado de polietilenglicol de bajo peso

Poco utilizado

Vectores virales

las dos células parentales pueden sufrir una recombinación natural. Los protoplastos se producen por la eliminación enzimática de la pared celular, que en consecuencia permite un acceso más directo a la membrana citoplasmática. Virus manipulados genéticamente para eliminar su capacidad autorreplicativa y la incorporación de genes, se emplea la capacidad natural de infección viral para introducirse a la célula e introducir el gen de interés.

molecular, corriente eléctrica, para neutralizar las cargas negativas de las membranas.

Elevada habilidad para transducir células. Retrovirus. Transmisión de generación en generación; ARN - ADN bicatenario Herpesvirus. Lleva grandes secuencias de ADN. Adenovirus. Alto nivel de expresión, infectan diferentes variedad de células sin necesidad de división. Adenoasociado. Integración brazo corto del cromosoma 19 humano

Rvirus. Inserción al azar. Adenovirus. Deficientes en replicación, requieren un sistema de complementación (línea celular HEK293) Adenoasociado. Integración de menos de 4 Kb

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