Manual de Prácticas de Química Clínica I, 2015 PRÁCTICA 4 CORRECTO USO DE MICROPIPETAS Las micropipetas son instrumentos de laboratorio utilizados para transferir pequeños volúmenes de líquido a un recipiente deseado. Generalmente transfieren volúmenes menores a 1 mililitro. Estas permiten emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato, utilizando puntas de plástico desechables para retener el volumen a trabajar. Las micropipetas pueden ser de volumen fijo o de volumen ajustable, multicanales o autoclaveables, de desplazamiento de aire, desplazamiento positivo, etc. En el laboratorio de Química Clínica I, las pipetas que se utilizarán durante las prácticas son las micropipetas de volumen ajustable por desplazamiento de aire, por lo que la información que se presenta en esta práctica tratará sobre estas micropipetas específicamente. I.- Partes de una micropipeta El diseño de una micropipeta puede tener leves variaciones de acuerdo a la marca de esta, por lo tanto, se recomienda que antes de utilizar una de estas herramientas, se debe familiarizar con el tipo de micropipeta con el que se va a trabajar. A continuación se listan las partes de una micropipeta tipo Gilson. El botón control se le conoce también como émbolo, el cual está encargado directamente de accionar el pistón dentro de la micropipeta. Luego se encuentran los anillos de fricción, los cuales se utilizan para ajustar el volumen de aspirado. El micrómetro, también llamado ventana de volumen, muestra el volumen con el que se está trabajando. El mecanismo de eyector de puntas funciona a través de un cilindro que se encuentra alrededor del cuerpo de la pipeta, el cual es empujado por el botón eyector de puntas. Al presionar el botón, el cilindro baja, empujando hacia afuera la punta desechable.

II.- Funcionamiento de las micropipetas Las micropipetas funcionan de acuerdo a un desplazamiento de aire provocado por el pistón, que se encuentra dentro de la micropipeta, cuando se presiona el émbolo. Este desplazamiento crea un vacío, que será reemplazado por el líquido a absorber cuando el pistón sube. Cuando el pistón se baja nuevamente, el aire desplaza el líquido haciéndolo salir, creando un nuevo vacío. Es muy importante que el líquido tomado por la micropipeta no toque el pistón; esto se puede evitar con el correcto uso de la micropipeta (ver recomendaciones generales).

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III.- Puntas de plástico Las puntas de plástico que utilizan las micropipetas están hechas de un material especial llamado polipropileno; este material es estable a la mayoría de las disoluciones acuosas y de muchos disolventes orgánicos, excepto el cloroformo (CHCl3). Las puntas no son resistentes a los ácidos nítrico o sulfúrico concentrado. De acuerdo con el volumen que puede contener la punta, éste puede ser de color azul, amarillo, blanco, u otros, sin embargo, estos colores van a depender del fabricador o la marca de las puntas. Generalmente, estas puntas se guardan en una caja especial o en un dosificador para que no se contaminen al tocarla con los dedos. IV.- Recomendaciones generales         

No trate de colocar la pipeta en volúmenes mayores que el máximo indicao, ni en volúmenes menores del mínimo permitido, esto descalibrará y dañará la micropipeta. Nunca utilizar la micropipeta sin punta desechable. No utilizar la micropipeta con líquidos que atacan el polipropileno. No utilizar líquidos que estén emitiendo vapores. La temperatura de los líquidos debe estar entre 15 y 40 ° C. Al poner la punta, asegúrese que la punta sea del tipo correcto y que esté correctamente ajustada. No colocar la micropipeta de manera horizontal o inclinada una vez que se ha tomado el líquido a trabajar. Colocar la mano de manera que se utilice el dedo pulgar para presionar el émbolo, NO el dedo índice. Si no se sumerge bien la punta en el líquido, no se aspirará el volumen seleccionado, formándose gotas y como consecuencia, el líquido puede introducirse al cuerpo de la micropipeta y de esta manera, dañarla.

V.-Procedimiento para su uso 1. PREPARACIÓN. Tomar la micropipeta en forma vertical con la posición de inicio y oprimir suavemente el émbolo utilizando el dedo pulgar, hasta el primer tope. 2. ASPIRACIÓN. Sumergir a punta de la micropipeta en el líquido. Mover el dedo pulgar hacia arriba muy lentamente, hasta que el émbolo se encuentre

Manual de Prácticas de Química Clínica I, 2015 en la posición de inicio. Esperar unos segundos hasta que el líquido se halla introducido a la punta de la micropipeta. 3. DISTRIBUCIÓN. Colocar la micropipeta en un ángulo de 10° a 45° y pegar la punta de la micropipeta a las paredes del recipiente que recibirá el líquido. Oprimir suavemente el émbolo con el pulgar hasta el primer tope. 4. PURGA. Esperar unos segundos, oprimir firmemente el émbolo hasta el segundo tope. Esto removerá cualquier cantidad remanente del líquido dispensado de la punta. 5. DESCANSO. Liberar el émbolo de la presión ejercida por el pulgar hasta que este alcance la posición de inicio.

Objetivos  

Que el estudiante aprenda el correcto uso de las micropipetas. Que el estudiante se familiarice con pipetas de diferentes marcas.

Materiales      

Pipetas de 100-1000 µL y de 10-100 µL Puntas desechables azules y amarillos Agua destilada Glicerol Extrán al 2% Beaker de 25 mL

Procedimiento I.-Cálculo de la masa de dos soluciones. Para este procedimiento se utilizarán dos líquidos de distinta densidad: agua destilada, con una densidad de 1 g/mL a 25 °C; y glicerol, con una densidad de 1.2656 g/mL a 25 °C. Para la micropipeta de 1001000 µL revisar los volúmenes de 300 y 700 µL y para la micropipeta de 10-100 µL revisar los volúmenes de 40 y 80 µL para cada solución.

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1. 2. 3. 4.

Seleccionar la micropipeta y las puntas adecuadas. Familiarizarse con la micropipeta a utilizar. Colocar el beaker en la balanza y tarar a cero. Tomar el volumen de la solución a analizar con la micropipeta y dispensarlo dentro del beaker. Registre el peso de la solución añadida. 5. Repetir el procedimiento 2 veces por cada volumen.

Agua destilada Glicerol

Peso del volumen 1 / /

Peso del volumen 2 / /

Discuta las variaciones obtenidas del peso de cada sustancia. II.- Uso de micropipetas con una solución jabonosa. Para este inciso deberá trasvasar una cantidad específica de solución de extrán al 2%. Utilice diferentes velocidades para aspirar y distribuir el líquido, y discuta el mejor método para “pipetear” esta solución. Preguntas de la Práctica: 1.-Mencione al menos 3 marcas de micropipetas que existen en el mercado y discuta las diferencias entre ellas. __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________

2.- ¿Cuál es el uso común para las micropipetas multicanales? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________

Bibliografía

Manual de Prácticas de Química Clínica I, 2015 PRÁCTICA 5 DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN DE MICROPIPETA Recuerde que una de las políticas de calidad de todo laboratorio clínico, es garantizar la confiabilidad de los resultados y la trazabilidad de las mediciones. Para dar cumplimiento a estos enunciados, es necesario, como una de las acciones preventivas determinar la precisión de las micropipetas que utilizan diariamente para la determinación de los diferentes analitos. Objetivos: Que cada uno de los grupos de laboratorio del curso de Química Clínica I:  

Determine la precisión de pipeteo de las micropipetas utilizando una solución coloreada. Determine e interprete el coeficiente de variación de la micropipeta.

Repetibilidad: Es importante conocer la precisión de pipeteo de la micropipeta. La precisión de pipeteo es determinada tanto por las características de la micropipeta así como de las habilidades y capacitación del personal. Materiales:   

Micropipeta. Tips nuevos. Solución de azul de metileno: - Solución A: Azul de metileno diluido 1/10 para realizar la precisión de pipeteo de volúmenes de 50, 100 y 250µL. - Solución B: Azul de metileno concentrado, para realizar la precisión de pipeteo de volúmenes de 5, 10 y 20µL.

Procedimiento: Cada grupo en el laboratorio debe:  

Evaluar 2 micropipetas en diferentes rangos. Evaluar la misma micropipeta, 2 personas diferentes.

1. Preparar una serie de 10 tubos con 1mL (1000uL) de agua destilada para cada serie y pipetear:

De la Solución “A”: 50 μl – 10 tubos 100 μl – 10 tubos 250 μl – 10 tubos   

De la Solución “B”: 5 μl – 10 tubos 10 μl – 10 tubos 20 μl – 10 tubos

Mezclar. Leer a 540nm. Anotar en formulario adjunto y realizar los cálculos estadísticos.

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ANOTAR LOS RESULTADOS OBTENIDOS Anotar las lecturas de absorbancias (a 540nm de cada tubo) 5μL 10μL 20μL 50μL 100μL

250μL

1 2 3 5 6 7 8 9 10 Media SD % CV % CV -

 

expresa la imprecisión de pipeteo.

Analizar los resultados obtenidos, en base al % CV obtenido. Incluir en su reporte de laboratorio las conclusiones, recomendaciones y acciones a seguir para controlar la precisión de las micropipetas.

Preguntas de la práctica: 1. Defina: Desviación estándar, coeficiente de variación. Explique en forma sencilla el procedimiento de cómo usted determinará la SD y el %CV _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________

Bibliografía